酶聯(lián)免疫分析儀(通常稱為ELISA儀)是一種用于定量測定樣本中特定抗原或抗體的儀器,廣泛應用于醫(yī)學、生物學和科研領域。以下是其測定步驟:
1.準備試劑與樣本:
-根據(jù)實驗需求,準備相應的酶標試劑、底物、終止液等。
-收集并處理待測樣本,確保樣本符合實驗要求。
2.設置實驗參數(shù):
-打開酶聯(lián)免疫分析儀,進入操作界面。
-根據(jù)實驗要求,設置波長、測量模式、反應時間等參數(shù)。
3.加樣與反應:
-在酶標板上按照實驗設計加入樣本、標準品及酶標試劑。
-將酶標板放入分析儀中,開始反應過程。
4.測量與讀數(shù):
-反應結(jié)束后,分析儀會自動測量各孔的光吸收值(OD值)。
-記錄或打印測量結(jié)果,進行數(shù)據(jù)分析。
5.清洗與維護:
-反應結(jié)束后,取出酶標板,清洗分析儀的測量部件。
-定期對分析儀進行維護和校準,確保其準確性和穩(wěn)定性。
酶聯(lián)免疫分析儀的優(yōu)點:
1.靈敏度高
-能夠檢測出極濃度的抗原或抗體。這是因為酶標記物的放大作用,一個抗原或抗體分子可以結(jié)合多個酶分子,而一個酶分子又可以催化多個底物分子產(chǎn)生大量的有色產(chǎn)物。例如,在檢測某些微量的蛋白質(zhì)激素(如胰島素)或病毒抗原(如乙肝病毒表面抗原)時,它能夠檢測出每毫升納克甚至皮克級別的物質(zhì),比一些傳統(tǒng)的檢測方法(如直接凝集試驗)靈敏得多。
2.特異性強
-基于抗原 -抗體反應的特異性,它只對特定的抗原或抗體進行檢測。在復雜的生物樣本(如血液、尿液等)中,能夠準確地識別出目標物質(zhì),而不受其他物質(zhì)的干擾。例如,在檢測艾滋病病毒抗體時,即使樣本中存在其他多種蛋白質(zhì)和微生物,它也能準確地檢測出抗HIV抗體,為疾病的診斷提供可靠的依據(jù)。
3.準確性好
-儀器采用標準化的操作流程和準確的光學檢測系統(tǒng)。操作過程中,加樣量、反應時間、溫度等條件都可以準確控制。而且,通過內(nèi)部的標準曲線和質(zhì)量控制體系,可以對檢測結(jié)果進行校準和驗證。例如,在臨床檢驗實驗室中,它可以對大量樣本進行檢測,并且保證每個樣本的檢測結(jié)果都具有較高的準確性,誤差范圍通??梢钥刂圃谳^小的范圍內(nèi),一般相對誤差在10以內(nèi)。
4.可重復性佳
-對于相同的樣本,在不同的時間或不同的儀器上進行檢測,只要操作條件一致,其結(jié)果具有良好的重復性。這是因為它的檢測原理和操作流程是相對穩(wěn)定的。例如,在藥物研發(fā)過程中,需要對同一批次的生物樣本進行多次檢測來評估藥物效果,酶聯(lián)免疫分析儀能夠保證每次檢測的結(jié)果基本一致,從而為研究提供可靠的數(shù)據(jù)支持。
5.檢測速度快
-相比一些傳統(tǒng)的生物學檢測方法(如微生物培養(yǎng)法),酶聯(lián)免疫分析儀可以在較短的時間內(nèi)完成檢測。一般來說,整個ELISA試驗過程(包括加樣、反應、洗滌和檢測)可以在幾個小時內(nèi)完成。例如,在急診檢驗中,對于懷疑是心肌梗死患者的心肌損傷標志物(如肌鈣蛋白)的檢測,它可以快速給出結(jié)果,為醫(yī)生的診斷和治療爭取時間。